液相色譜理論發(fā)展簡介
色譜的分離原理是：當溶解在流動相中的組分通過固定相時，它們會與固定相發(fā)生相互作用（吸附、分布、離子吸引、排斥、親和）。大小和強度不同，在固定相中的停留時間也不同，所以從固定相中陸續(xù)流出。也稱為色譜和斷層掃描。
1906 年，俄羅斯植物學家 Tswett 在研究植物色素與碳酸鈣的分離時，首先發(fā)現(xiàn)了色譜法。色譜法以它命名。后來在此基礎上又發(fā)展了紙色譜、薄層色譜、氣相色譜和液相色譜。
液相色譜的初始階段是使用大口徑玻璃柱在常溫常壓下以液位差輸送流動相。這種方法稱為經典液相色譜法。這種方法柱效低，時間長（往往幾個小時）。高效液相色譜（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經典液相色譜的基礎上發(fā)展起來的，在1960年代后期，氣相色譜理論被引入并得到迅速發(fā)展。它與經典液相色譜的區(qū)別在于填料顆粒小而均勻。小顆粒具有高柱效但會產生高阻力。輸送流動相需要高壓，故又稱高壓液相色譜（HPLC）。由于分析速度快，它也被稱為高速液相色譜（HSLP）。也稱為現(xiàn)代液相色譜。
HPLC液相色譜柱采用特殊的鍵合工藝，雙重密封，鍵合密度高，碳含量高，疏水性高（低極性），適用于各種非極性化合物的分析，在酸或堿中均有良好的分離效果在流動相下。
HPLC液相色譜柱尺寸選擇
色譜柱越長，組分保留越強，運行時間越長，柱效越高，分離效果越好。在實際工作中，要綜合測量運行時間和柱效，選擇合適長度的色譜柱。例如，含量測定和溶出度測試對分離的要求較低。可以使用較短的色譜柱以減少運行時間；對于有關物質，一般選擇較長的色譜柱，以提高分離效果。
小內徑色譜柱靈敏度更高，峰形更窄，但上樣量更小。如果上樣量滿足要求，則需要更高更尖的峰以提高靈敏度，可選擇更小的內徑。但是，如果進樣量超過色譜柱裝載量，色譜峰將大大展寬。因此，應在靈敏度和上樣量之間進行綜合衡量。
色譜柱粒徑如何影響色譜分離？
小粒徑色譜柱具有更好的分離度和更高的色譜柱壓力。如果 5μm 色譜柱的分離度稍顯不足，則相同型號的 3μm 色譜柱的分離度通常會提供令人滿意的選擇性。
如果您選擇較小尺寸的色譜柱，您應該測量柱外死體積對柱效的影響。柱外死體積包括連接管路、進樣體積以及色譜柱接頭與色譜柱接頭之間的間隙。因此，一般超高效液相使用的色譜柱不適用于常規(guī)液相儀器。小尺寸色譜柱使用同品牌儀器，以減少連接處間隙引入的死體積。Hawach提供3μm、5μm粒徑的HPLC柱，如CN HPLC柱、NH2 HPLC柱和SCX HPLC柱。
