霉菌**主要是指霉菌在其所污染的食品或是飼料中產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，在飼料的加工、運輸和貯存過程中都可能會產(chǎn)生。據(jù)統(tǒng)計，已知的霉菌**有300多種，常見的**有：黃曲霉**，玉米赤霉烯酮/F2**，赭曲**，T2**，煙曲霉**，赭曲霉**，嘔吐**，麥角**等。

霉菌**污染多為復合型，飼料中大多存在3種以上的霉菌**污染。霉菌**通過飼料或食品進入人和動物體內(nèi)，引起人和動物的急性或慢性毒性，損害機體的肝臟、腎臟、神經(jīng)組織、造血組織及皮膚組織等。因此，霉菌**的檢測必須引起重視，防患于未然。

飼料中霉菌**檢測方法主要有目測法，薄層色譜法（TLC），高效液相色譜法（HPLC），酶聯(lián)**吸附法（ELISA），放射**法（KIA）及快速試紙檢測法。

其中酶聯(lián)**吸附法（ELISA）此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。經(jīng)過三四十年發(fā)展，ELISA技術(shù)已經(jīng)作為一個成熟的快速篩選方法，應用于不同的行業(yè)，美國USDA，EPA將眾多ELISA的方法作為官方快速篩選方法。

酶聯(lián)**吸附法（ELISA）的基本原理是，在合適的載體上，酶標記抗體或抗原與相應的抗原或抗體結(jié)合成酶標記抗體抗原復合物，在酶底物的參與下，復合物上的酶催化底物使其水解成為另一種帶色物質(zhì)，其核心就是讓抗體與酶復合物結(jié)合，然后通過顯色深淺來進行分析。

該法優(yōu)點突出，1）靈敏度高，干擾?。嚎贵w抗原的**反應特異性很強，結(jié)構(gòu)類似物、熒光物質(zhì)、有色物質(zhì)對檢測的干擾很小。2）操作簡便快捷：由于特異性強，簡化了樣品的預處理和提取純化過程，同時測定時間短。3）**性高，污染少，成本低廉：不需要昂貴的測定儀器，且所用試劑也相對較少，**標準品的濃度可以很低，減少了對檢測人員和環(huán)境的潛在危害和污染。尤其適用于大批量樣品的快速測定。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。根據(jù)待測物的情況及檢測的具體條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。如：雙抗體夾心測抗原、雙抗體夾心測抗體、間接法測抗原、間接法測抗體、競爭法測抗原、競爭法測抗體等，目前的試劑盒大多屬于抗體包被直接競爭ELISA法。

目前國際上比較認可的霉菌**檢測模式是，試劑盒篩選加大型儀器確證方法配合使用。試劑盒應用于樣品的實驗室快速篩選，結(jié)果準確性比較高，對于大批量的樣品測定分析可有效節(jié)約成本，縮短分析時間。

1，稱粉碎好的樣品5g

2，加入0.5gNaCl

3，加入25mL70%甲醇/水

4，超聲萃取5min

5，4000轉(zhuǎn)離心5min

6，離心后的樣品取上清液過玻璃纖維濾紙過濾

7，加入100ul的酶標記物到混合孔，再加入50ul的標準品及樣品到相應混合孔，混勻后轉(zhuǎn)移100ul到相應的測試孔中。加入50ul抗體到對應的每一個測試孔。

8，震蕩5s，20-28℃孵育10min

9，清洗液洗板4次

10，加入100ul顯色液,顯色8min

11，顯色8min后

12，加入100ul停止液，讀板。

根據(jù)與標準品的顏色比對來進行快速篩選，對于霉菌**處于國家規(guī)定限量范圍左右的樣品可再通過大型儀器進行更精準的定量分析。

Beacon試劑盒

Casco試劑盒和**親和柱

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